Cuando se trata de electroforesis en gel de poliacrilamida (SDS-PAGE). Me refiero a esto:
Generalmente usamos la técnica que aprendimos de nuestro director/ra de tesis (y que a su vez el/ella la aprendió de su director/ra).
Algunos preparan los buffers de corrida y de transferencia en el momento y otros los reciclamos varias veces. Lo importante es que funcione.
Tenemos que obtener resultados y publicar rápido,
no vamos a perder el tiempo modificando una simple técnica
¿Verdad?
Ahora bien, un grupo decidió "perder el tiempo" y publicó este trabajito en Journal of Biomolecular Techniques.
En este trabajo, los autores analizan lo que pasa cuando se reciclan los buffers de corrida en una SDS-PAGE y de transferencia para un Western blot.
Nota: Si quieren saber como se preparan estos buffers, pueden utilizar mi programa para calcular soluciones, donde existe un apartado para preparar soluciones comunes de laboratorio. Incluidas las que se mencionan en esta nota.
Primeramente, los autores no encontraron efectos negativos en reciclar hasta 5 veces el buffer de corrida.
Efecto del reciclado del buffer RB en SDS-PAGE. Note como todos los experimentos del 1 al 5 no presentan diferencias significativas de calidad en lo que se refiere a la movilidad de las proteínas utilizadas para el ensayo.
Sin embargo, el uso repetido de buffer de transferencia (Buffer de corrida + 20% metanol) resultó en una reducción (prácticamente desde el primer momento) en la transferencia de proteínas a membranas de nitrocelulosa.
Efecto del reciclado del buffer de transferencia en la transferencia de proteínas. Note como la cantidad de las proteínas transferidas a la membrana de nitrocelulosa va decayendo a medida que el buffer de transferencia es reutilizado. Las proteínas de mayor tamaño son las más afectadas.
Este efecto se debe principalmente a la perdida por evaporación y/u oxidación del metanol durante el proceso.
Para tener en cuenta
Durante una transferencia, el metanol ayuda a remover el SDS unido a las proteínas y favorece su unión a la membrana de nitrocelulosas (o de PVDF).
Poco metanol y las proteínas no se unen bien a la membrana, mucho metano y las proteínas quedan fijadas en el gel.
Conclusión
Se puede reciclar el buffer de corrida, pero no es conveniente hacer lo mismo con buffer de transferencia.
Nota: A muchos esto no les afecta, ya que preparan el buffer de transferencia agregando metanol al buffer de corrida recién utilizado.
En mi caso, yo preparo buffer de corrida por un lado y buffer de transferencia sin SDS por el otro.
Aunque no lo he probado, también se puede usar Etanol en lugar de Metanol. Las razones de usar uno u otro, radica en que en algunos países (como en EE.UU.) las regulaciones son más estrictas para el uso de etanol mientras que en otros es al revés.
En Argentina, el ente que regula la compra de etanol o metanol como reactivos de laboratorio (entre muchos otros) es el SEDRONAR.
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